印迹膜有什么特点
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生物印迹技术是将待测生物大分子结合到一定固相支持物(微滤膜)上的方法。主要印迹技术有Northern印迹、Southern印迹。生物印迹技术中的印迹膜是专门用于分离和检测生物分子(如蛋白质、核酸、细胞等)的材料。
目录 |
1、Northern印迹、Southern印迹、Western印迹区别对比 2、印迹膜特性
3、印迹膜性能验证 4、迈博瑞印迹膜参数 |
一、Northern印迹、Southern印迹、Western印迹区别对比
|
Southern blot |
Northern blot |
Western blot |
定义 |
用于识别特定DNA序列的程序 |
Southern blot的改编,通过与互补DNA的杂交来检测特定RNA序列 |
用于鉴定蛋白质中特定氨基酸 序列的印迹程序 |
开发者 |
1975年,爱德华 |
1977年,詹姆斯.阿尔温等人 |
1979年,乔治.斯塔克 |
检测到的分子类型 |
特异性DNA序列 |
特异性RNA序列 |
特定蛋白质 |
电泳 |
琼脂糖凝胶电泳 |
甲醛琼脂糖凝胶电泳 |
SDS PAGE/聚丙烯酰胺凝胶 |
印迹程序 |
毛细管转移 |
毛细管转移 |
电动传输 |
探针 |
DNA探针 |
cDNA探针 |
一抗和二抗 |
样本制备 |
变性处理 |
自然状态 |
自然状态 |
应用 |
检测给定样品中特定DNA序列 |
识别给定样品中特定RNA序列 |
识别给定样品中的蛋白质数量 |
检测系统 |
放射自显影、光检测和颜色变化 |
放射自显影、光检测和颜色变化 |
检测光线和颜色变化 |
二、印迹膜特性
1、印迹膜作为印迹技术中的重要固相支持物的主要特性
名称 |
特点 |
NC 印迹膜 |
无支撑布 不添加洗涤剂 100% 纯硝化纤维 高蛋白结合能力 毛细管率与厚度一致 背浅 |
PVDF 印迹膜 |
耐化学性 无变色 非易燃 高强度 疏水性 背景浅 高蛋白结合 |
尼龙印迹膜 |
亲水性 高强度 高化学耐受性 高蛋白结合力 |
2、NC印迹膜、尼龙印迹膜和PVDF印迹膜的区别
|
正电尼龙印迹膜 |
硝酸纤维素印迹膜 |
PVDF印迹膜 |
DNA或RNA截留力 |
480-600ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
125-300ug/cm2 |
蛋白截留力 |
500ug/cm2 |
80-100ug/cm2 |
100-300ug/cm2 |
结构强度 |
柔韧、耐化学试剂,可重复剥离 |
膜脆、易破碎,不可重复使用 |
强度高、耐高温、可重复剥离 |
吸附力 |
电荷和疏水作用 |
疏水作用和电荷 |
疏水作用和电荷 |
是否需活化 |
无需活化 |
无需活化 |
需要活化 |
检测方法 |
放射性标记探针 |
放射性标记探针 |
直接染色 |
三、印迹膜性能验证
- 印迹膜对生物分子的最大吸附能力验证
- 印迹膜转印生物分子效果验证
- 印迹膜转印烧穿检测验证
- 转印膜背景及灵敏度(最低检测限度)验证
- 转印膜吸附生物分子作用力(疏水和电荷)验证
四、迈博瑞印迹膜参数
名称 | 湿润性 | 灵敏度和分辨率 | 背景 | 机械强度 | 溶剂耐受性 | 水润性 | 蛋白结合能力 | 适用染色方法 | 检测方式 |
Nylon66印迹膜 | 亲水性 | 高 | 较高 | 软而结实 | 较差 | 缓冲溶液润湿 | >400μg/cm2 | 不能用阴离子染料 | 不能用阴离子染料,受限制 |
NC转印膜 | 亲水性 | 高 | 低 | 干的NC膜易脆 | 差 | 缓冲溶液润湿,避免气泡 | 80-110μg/cm2 | 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁 | 常规染色,可用放射性和非放射性检测 |
PVDF转印膜 | 疏水性 | 高 | 浅 | 机械强度高 | 好 | 100%的甲醇润湿 | 125-200μg/cm2 | 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰 | 常规染色,较于NC膜可用考马斯亮蓝染色,ECL检测和快速免疫检测 |
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