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NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比

标签: 转印膜

目录
1、什么是Western Blot
2、NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比
3、迈博瑞转印膜推荐

 

一、什么是Western Blot

就像与SDS提供的电荷结合一样,蛋白质可以在电场中从凝胶转移到坚固的载体上,即从凝胶中“印迹”到膜。这种方法被称为蛋白免疫印迹转印。

Western Blot

蛋白免疫印迹法中蛋白从凝胶转印到膜上


转膜方式主要有两种:湿转和半干转。两者原理相同,只是用于固定胶/膜叠层及施加电场的仪器有不同。半干转耗时短,但是更适合小分子蛋白的转印,而湿转蛋白分子量范围较宽,在Western Blot实验中,常用的是湿转。

 

二、NC转印膜、PVDF转印膜、正电荷尼龙转印膜的优缺点对比

在蛋白质和核酸的转移和检测过程中,我们都常用的转印膜有三种:正电荷尼龙转印膜/硝酸纤维素NC转印膜/聚偏二氟乙烯膜PVDF转印膜。不同的转印膜规格和参数不同。选择正确、均一稳定的转印膜对达到最佳的实验结果起到关键性作用。

PVDF转印膜

NC转印膜

正电荷尼龙转印膜

机械强度高、质地柔韧、易于保存
化学稳定性好、耐腐蚀、不易降解
相对较高的蛋白质结合能力和高信噪比
可用于多次剥离和杂交
需要甲醇等溶液浸泡预湿活化
可用于Western杂交、dot/slot杂交、蛋白质测序、以及MS分析。

极易破碎不易操作
溶剂不耐受
蛋白结合能力相对较低
不利于多次剥离和杂交
不需要预湿处理
结合能力强、不需要活化
背景浅、能进行多次免疫检测并且功能基团寿命长
适用于蛋白质印迹法、RNA印迹法、DNA印迹法和斑点杂交技术

高的灵敏度和
低的背景信号
长耐久性、可耐受多次重复杂交试验
适用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot实验

在蛋白免疫印迹法中,可根据靶蛋白分子大小选择0.2 µm或0.45 µm孔径的膜。在大多数应用中,PVDF和硝酸纤维素是等效的。请注意,PVDF的容量高于硝酸纤维素,但需要更仔细的预处理:根据凝胶大小将膜切割成适当大小,通常比凝胶稍大一点;在甲醇中浸泡约30秒;在ddH2O中清洗约1分钟,然后在冰冷的转印缓冲液中孵育5分钟。凝胶还需要在冰冷的转印缓冲液中平衡3-5分钟。

 

三、迈博瑞转印膜推荐

MS®转印膜主要是参与Southern印迹杂交和Northern印迹杂交实验,用于实现基因诊断,通常都是将杂交结果转移到印记膜上,作为最终判断依据。印迹膜有多种形式:0.2um和0.45um的PVDF转印膜、硝酸纤维素转印膜、(Nylon66)尼龙转印膜,这是一种经验证的western 杂交介质,PVDF用于高载量免疫印迹和蛋白测序。

名称 湿润性 灵敏度和分辨率 背景 机械强度 溶剂耐受性 水润性 蛋白结合能力 适用染色方法 检测方式
Nylon66印迹膜 亲水性 较高 软而结实 较差 缓冲溶液润湿 >400μg/cm2 不能用阴离子染料 不能用阴离子染料,受限制
NC转印膜 亲水性 干的NC膜易脆 缓冲溶液润湿,避免气泡 80-110μg/cm2 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁 常规染色,可用放射性和非放射性检测
PVDF转印膜 疏水性 机械强度高 100%的甲醇润湿 125-200μg/cm2 胶体金、丽春红、酰胺黑、印度墨汁、考马斯亮兰 常规染色,较于NC膜可用考马斯亮蓝染色,ECL检测和快速免疫检测

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